Oncotarget опубликовано: « Опосредованное сдвигом рамки ограничение функции p53 R273H и делеция С-конца R273H в клетках рака груди приводят к репликационной чувствительности к стрессу » которые сообщили, что эти авторы недавно задокументировали, что мутантный p53 R273H с повышенной функцией в тройных отрицательных клетках рака молочной железы взаимодействует с реплицирующейся ДНК и PARP1. Миссенс R273H GOF mtp53 имеет мутированный центральный ДНК-связывающий домен, который делает его неспособным специфически связываться с ДНК, но сохраняет способность тесно взаимодействовать с хроматином.

Как С-концевой домен, так и домен олигомеризации белков GOF mtp53 не повреждены, и неясно, ответственны ли эти области mtp53 за основанную на хроматине репликацию ДНК.

Они включали сдвиг рамки считывания mtp53 R273Hfs387, который истощал экспрессию белка mtp53; mtp53 R273HΔ381-388, который имел небольшую делецию в CTD; и mtp53 R273HΔ347-393, у которого были усечены как OD, так и CTD области.

mtp53 R273HΔ347-393 существовал исключительно в виде мономеров и нарушал хроматиновое взаимодействие mtp53 R273H.

Взятые вместе эти Oncotarget результаты показывают, что CTD- и OD-домены mtp53 R273H играют критическую роль в мутантном p53 GOF, который имеет отношение к процессам, связанным с репликацией ДНК.

Белок-супрессор опухоли p53 хорошо известен как фактор транскрипции, но p53 также выполняет независимые от транскрипции функции. "

Д-р. Джилл Баргонетти

Хотя полученные из опухоли миссенс-белки mtp53 имеют измененные функции, они содержат два N-концевых домена трансактивации, за которыми следуют богатый пролином домен, измененный центральный домен связывания ДНК, а также домен олигомеризации и С-концевой регуляторный домен.

Здесь они дополнительно исследуют способность mtp53 R273H и его OD и CTD областей влиять на пролиферацию клеток, репликацию ДНК и развитие клеточного цикла клеток рака молочной железы.

Выбор исследовать потенциальную роль доменов OD и CTD в контексте аллеля mtp53 R273H был двояким:

1. Они очертили вышеупомянутый путь GOF на этом фоне и параллельно с описанными исследованиями работали над созданием дополнительных инструментов для выяснения роли каждого домена в активности GOF mtp53;
2. Их стремление к генетическому подходу с использованием технологии CRISPR-Cas9 для создания специфических изменений в каждом домене потребовало, чтобы мы сначала сосредоточились на одной линии клеток, экспрессирующих mtp53 R273H.

Они увидели, что мутация сдвига рамки считывания на С-конце mtp53 снижает стабильные уровни белка R273H mtp53 по сравнению с родительскими клетками MDA-MB-468, снижает пролиферацию клеток и снижает ассоциацию белков репликации с хроматином, что отражает их медленное развитие. через S-фазу.

Нацеливание CRISPR-Cas9 также привело к образованию клонов клеток с усеченными на С-конце белками mtp53 R273H; такие клетки с усеченным mtp53 R273H показали пониженную пролиферацию по сравнению с родительскими клетками, но продвигались через S-фазу аналогичным образом.

Исследовательская группа Баргонетти пришла к выводу в своих результатах исследования Oncotarget что их текущие исследования не указывают на конкретную функцию, выполняемую доменами OD и CTD в ответ на тимидин; однако они могут показать, что их потеря не влияет на сборку реплисом в начале S-фазы, как измерено с помощью загрузки хроматина PCNA, и они обратятся к этому открытию в будущем.

Таким образом, функция (и) домена OD и CTD коррелирует с событиями после входа в S-фазу, в отличие от функции, обеспечиваемой другим доменом (ами) p53, дефицитным в клеточной линии mtp53fs387, потеря которого препятствует вступлению в S-фазу. Хотя в настоящее время авторы не могут сформулировать точную роль этих отдельных участков р53 в ответ на тимидин, их исследования предполагают, что они могут функционировать на отдельных во времени стадиях S-фазы.