Девяносто девять процентов случаев рака шейки матки вызваны вирусом папилломы человека (ВПЧ). Более 200 ВПЧ, некоторые из которых связаны с различной степенью риска заболевания раком, усложняют диагностику и лечение. В отчете «Журнала молекулярной диагностики» опубликованном Elsevier, описан новый диагностический подход «два к одному», который не только определяет тип инфекции ВПЧ, но и указывает на предраковые маркеры. Этот тест может улучшить способность диагностировать наиболее рискованные формы инфекции ВПЧ, обеспечить быстрые результаты при низких затратах и ​​помочь избежать ненужных диагностических процедур.

Мы разработали HPV RNA-Seq, новую методику молекулярной диагностики in vitro для выявления инфекции HPV высокого риска и идентификации пациентов с плоскоклеточными интраэпителиальными поражениями высокого уровня (HSIL), которые являются предраковой стадией шейка матки. HPV RNA-Seq – это уникальный тест, который сочетает в себе преимущества молекулярных анализов (типирование HPV) и цитологию шейки матки (фенотипирование клеток). "

Ведущий исследователь Марк Элоит, доктор медицинских наук, доктор философии, лаборатория обнаружения патогенов, отдел биологии инфекции, Институт Пастера, Париж, и Национальная ветеринарная школа Альфорта, Университет Париж-Восток, Мезон-Альфор, Франция

Скрининг рака шейки матки позволяет обнаруживать и лечить предраковые поражения до развития рака. В настоящее время скрининг либо фокусируется на тестировании на ВПЧ или выявлении аномальных клеток шейки матки с цитологическим анализом. Тем не менее, молекулярные диагностические тесты, которые обнаруживают ДНК или РНК вирусов, плохо выявляют рак или предраковые поражения. Анализ клеток шейки матки с помощью теста Пап, даже в сочетании с молекулярным обнаружением ВПЧ высокого риска, приводит к значительному количеству ненужных кольпоскопий, инвазивного теста, с помощью которого врач визуально проверяет наличие повреждений шейки матки.

В этом исследовании, подтверждающем концепцию, HPV RNA-Seq использовалась для анализа образцов 55 пациентов, 28 с плоскоклеточными интраэпителиальными поражениями низкой степени тяжести (LSIL) и 27 пациентов с предраковым уровнем HSIL.

HPV RNA-Seq была способна обнаруживать и определять тип инфекции HPV среди панели из 16 HPV высокого риска с результатами, сопоставимыми с широко используемым и официально одобренным набором для молекулярной диагностики ДНК HPV. Фактически, HPV RNA-Seq обнаружила еще двух HPV-положительных пациентов, чем тест ДНК, а также выявила больше пациентов с множественными инфекциями HPV.

Было установлено, что тест имеет чувствительность (способность обнаруживать присутствие ВПЧ) 97,3% и отрицательную прогностическую ценность (NPV, вероятность отсутствия ВПЧ) 93,8%. «Эффективный скрининг на рак шейки матки требует высокой чувствительности и NPV для ВПЧ-инфекции высокого риска, поскольку женщины с отрицательным ВПЧ-тестом обычно снова проходят тестирование только через несколько лет», – отметил профессор Элоит.

Цитология используется в качестве быстрого метода для сортировки пациентов с ВПЧ, тогда как гистология считается золотым стандартом для диагностики рака шейки матки. Гистологический анализ, однако, является более инвазивным и требует больше времени для получения результатов. Чтобы определить, имеет ли новый тест место в сортировке рака шейки матки, исследователи также сравнили цитологию с ВПЧ-РНК-Seq и обнаружили маркеры высококачественной цитологии с обнадеживающими диагностическими показателями ВПЧ-РНК-Seq в качестве теста на сортировку. Они также обнаружили, что положительная прогностическая ценность (PPV, вероятность инфицирования HPV) РНК-Seq HPV по сравнению с гистологией всегда была выше, чем PPV по цитологии и гистологии. «Это наблюдение представляет собой веский аргумент в пользу потенциальной дополнительной медицинской ценности РНК-Seq ВПЧ по сравнению с цитологией», – прокомментировал профессор Элоит.

проф. Элоит предполагает, что использование HPV RNA-Seq у некоторых пациентов может помочь устранить ненужные кольпоскопии. Он также предвидит время, когда технология позволит одновременно запускать несколько образцов, что снизит стоимость, возможно, от 10 до 20 долларов за тест. Тест также может быть применим для других видов рака, связанных с ВПЧ, таких как анальный рак и рак головы и шеи.

HPV RNA-Seq основана на двойной комбинации мультиплексной ПЦР с обратной транскрипцией (RT-PCR) и секвенирования следующего поколения (NGS). ОТ-ПЦР является чувствительным способом измерения небольших количеств РНК, генетического материала, который отражает активность генов ВПЧ, и NGS позволяет точно охарактеризовать разнообразие амплифицированных вирусных последовательностей. Это позволяет обнаружить до 16 ВПЧ высокого или предполагаемого высокого риска в пробе, а также наличие предраковых маркеров.

«Наш подход следует современной тенденции разработки панелей ампликонов NGS для молекулярной диагностики, оставаясь при этом адаптируемым к традиционным форматам молекулярных анализов. Такая гибкость может сделать HPV RNA-Seq удобным, надежным и доступным решением для многих лабораторий», добавил ведущий автор Филипп Перо, доктор философии, лаборатория обнаружения патогенов, отдел биологии инфекции, Институт Пастера, Париж, Франция.